Microbiological and molecular detection of Mycoplasma bovis in milk samples from bovine clinical mastitis / Detecção microbiológica e molecular de Mycoplasma bovis em amostras de leite oriundas de mastite clínica bovina

The genus Mycoplasma includes more than 200 bacterial species that cause disease in animals. It is responsible for causing mastitis in bovines and may be related to other manifestations, such as arthritis and pneumonia in calves and heifers. The present study aimed to detect Mycoplasma bovis isolated from milk samples of bovine clinical mastitis, and to compare the isolation rates in two culture media: Hayflick and SP4. An initial screening was performed in order to detect the presence of the class Mollicutes in 1166 milk samples from clinical mastitis by the conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. According to the 1166 milk samples evaluated, 8.6% (100/1166) were positive to class Mollicutes. Regarding molecular analyses, 1.1% (13/1166) of conventional PCR for positive M. bovis was obtained and 0.9% (11/1166) in real-time PCR. The results of the microbiological culture of the 100 samples previously screened demonstrated that 6% (6/100) of colony growth have been developed when using the Hayflick medium, and 11% (11/100) when using the SP4 medium (including the positive on Hayflick medium). Concerning the 11 isolates obtained in the microbiological culture, conventional PCR confirmed M. bovis in nine of them, and two cultures were negative. In the phylogenetic analysis of the isolates, all of them were grouped in M. bovis and M. agalactiae clusters. The results confirmed the importance of the presence of M. bovis in the etiology of bovine clinical mastitis and reinforced the need for further studies to elucidate other Mycoplasma species that may be involved in bovine clinical mastitis in Brazil.(AU)

O gênero Mycoplasma inclui mais de 200 espécies que causam doenças nos animais. É responsável por quadros de mastite em bovinos, podendo também estar relacionado à outras manifestações como artrite e pneumonia em bezerros e novilhas. O presente estudo objetivou a detecção de Mycoplasma bovis isolados a partir de amostras de leite de mastite clínica bovina, bem como, a comparação da taxa de isolamento em dois meios de cultura: Hayflick e SP4. Para efeito de triagem amostral, foram avaliadas quanto à presença da classe Mollicutes 1166 amostras de leite de casos de mastite clínica pela técnica de PCR convencional. Das 1166 amostras de leite avaliadas, 8,6% (100/1166) foram positivas à classe. Nas análises moleculares, obteve-se 1,1% (13/1166) de positividade para Mycoplasma bovis na PCR convencional e 0,9% (11/1166) na PCR em tempo real. Os resultados do cultivo microbiológico das 100 amostras triadas previamente demonstraram 6% (6/100) de crescimento de colônias ao se utilizar o meio Hayflick e 11% (11/100) ao se utilizar o meio SP4 (incluindo as positivas ao primeiro). A partir dos 11 isolados obtidos no cultivo microbiológico, a PCR convencional confirmou Mycoplasma bovis em nove deles, e dois foram negativos para o agente. Na análise filogenética dos isolados, todos agruparam no cluster Mycoplasma bovis e Mycoplasma agalactiae. Frente aos resultados, ressalta-se a importância da presença de Mycoplasma bovis na etiologia da mastite clínica bovina e reforça a necessidade de estudos mais aprofundados para a elucidação de outras espécies de micoplasmas que possam estar envolvidas na mastite bovina.(AU)

Inhibition of the growth of major mastitis-causing pathogens by non-aureus Staphylococcus isolates using the cross-streaking method / Comunicação: Inibição do crescimento dos principais patógenos causadores de mastite por isolados de estafilococos não aureus pelo método cross-streaking

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.(AU)

Caracterização fenotípica pela técnica de MALDI-TOF de Staphylococcus coagulase negativa isolados de mastite bovina em rebanhos leiteiros do Sul de Minas Gerais / Phenotypic characterization by the MALDI-TOF technique of Staphylococcus coagulase negative isolated from bovine mastitis in dairy herds of the South of Minas Gerais

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.

Levantamento de agentes causadores de mastite e sua resistência a antibióticos / Survey agents of mastitis causes and their resistance to antibiotics

Dentre as enfermidades que acometem o rebanho leiteiro a mastite é a que apresenta o maior impacto econômico, assim com o objetivo de identificar os agentes causadores de mastite e de avaliar a sua resistência a antibióticos, analisou-se 119 amostras de leite, coletadas de 47 unidades produtoras distribuídas em 10 municípios da microrregião de Pelotas no RS. Das amostras analisadas, 76,7% agentes foram classificados como Gram positivos (G+) e 23,3% como Gram negativos (G-) . Das amostras G+ analisados, os que obtiveram maior resistência por parte dos microrganismos isolados, classificados como Gram positivos, foram trimetropin (70% ), seguido da penicilina (65,2%). Já os antimicrobianos com maior resistência por parte dos isolados de G-, foram cefalotina (85,7%), seguido de trimetropin (80,9%). Por fim, as 16 amostras de Staphylococcus coagulase positiva, foram 100% resistentes a estreptomicina. Verifica-se assim a importância de um adequado manejo para o correto uso dessas drogas.

Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis / Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.(AU)

Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.(AU)

Mastites em ruminantes no Brasil / Mastitis in ruminants in Brazil

A mastite é uma doença complexa e considerada uma das principais causas de perdas à indústria leiteira mundial. Objetivou-se com esta revisão compilar informações dos últimos dez anos sobre a mastite em ruminantes no Brasil. A prevalência da mastite subclínica chega a 48,64% na espécie bovina, 30,7% na espécie caprina, 31,45% na espécie ovina e 42,2% na espécie bubalina, destacando-se a etiologia por Staphylococcus spp. Os fatores de risco associados à ocorrência de mastite estão relacionados a problemas no saneamento ambiental e ao manejo dos animais. As bactérias isoladas do leite mastítico apresentam maior percentual de resistência a penicilina, ampicilina, amoxicilina e neomicina e a utilização de técnicas moleculares no diagnóstico dos agentes causadores de mastites no país, ainda é escassa o que dificulta a obtenção de um diagnóstico mais rápido, sensível e específico.(AU)

Mastitis is a complex disease and is considered one of the main causes of losses to the global dairy industry. The objective of this review was to compile information for the last ten years of mastitis in ruminants in Brazil. The prevalence of subclinical mastitis was 48.64% in cattle, 30.7% in goats, 31.45% in sheep and 42.2% in the buffalo species, with especial participation of Staphylococcus spp. in the etiology. Risk factors associated with the occurrence of mastitis were related to problems in environmental sanitation and handling of animals. The largest percentage of resistance of microorganisms to antimicrobials was for penicillin, ampicillin, amoxicillin and neomycin. The use of molecular tools for diagnosis of mastitis-causing agents in the country is still scarce, making it difficult to obtain a faster, sensitive and specific diagnosis.(AU)

Etiology, antimicrobial susceptibility profile of Staphylococcus spp. and risk factors associated with bovine mastitis in the states of Bahia and Pernambuco / Etiologia, perfil de sensibilidade dos Staphylococcus spp. aos antimicrobianos e fatores de risco associados à mastite bovina nos estados da Bahia e Pernambuco

The purpose of this paper was to study the etiology of mastitis, determine the antimicrobial susceptibility profile of Staphylococcus spp. and to identify the risk factors associated with infection in dairy cows in the states of Bahia and Pernambuco, Brazil. From the 2,064 milk samples analyzed, 2.6% were associated with cases of clinical mastitis and 28.2% with subclinical mastitis. In the microbiological culture, Staphylococcus spp. (49.1%) and Corynebacterium spp. (35.3%) were the main agents found, followed by Prototheca spp. (4.6%) and Gram negative bacilli (3.6%). In the antimicrobial susceptibility testing, all 218 Staphylococcus spp. were susceptible to rifampicin and the least effective drug was amoxicillin (32.6%). Multidrug resistance to three or more drugs was observed in 65.6% of Staphylococcus spp. The risk factors identified for mastitis were the extensive production system, not providing feed supplements, teat drying process, not disinfecting the teats before and after milking, and inadequate hygiene habits of the milking workers. The presence of multiresistant isolates in bovine milk demonstrates the importance of the choice and appropriate use of antimicrobial agents. Prophylactic and control measures, including teat antisepsis and best practices for achieving hygienic milking should be established in order to prevent new cases of the disease in herds.

Objetivou-se estudar a etiologia da mastite, determinar o perfil de sensibilidade dos Staphylococcus spp. aos antimicrobianos e identificar os fatores de risco associados à infecção em vacas leiteiras nos estados da Bahia e Pernambuco. Das 2.064 amostras de leite analisadas, 2,6% estavam associadas a casos de mastite clínica e 28,2% à mastite subclínica. No exame microbiológico, Staphylococcus spp. (49,1%) e Corynebacterium spp. (35,3%) foram os principais agentes isolados, seguidos de Prototheca spp. (4,6%) e bacilos Gram negativos (3,6%). No teste de sensibilidade aos antimicrobianos, todos os 218 Staphylococcus spp. apresentaram-se sensíveis à rifampicina e a droga menos eficaz foi a amoxicilina (32,6%). A resistência simultânea a três ou mais drogas foi observada em 65,6% dos Staphylococcus spp. Os fatores de risco identificados para a mastite foram o sistema de criação extensivo, não realização de suplementação alimentar, processo de secagem dos tetos, não realização de desinfecção dos tetos antes e após a ordenha e hábitos higiênicos inadequados dos ordenhadores. A presença de isolados multirresistentes no leite bovino demonstra a importância da escolha e da utilização adequada de antimicrobianos. Medidas de controle e profilaxia, incluindo a antissepsia dos tetos e boas práticas para a obtenção de ordenha higiênica devem ser estabelecidas, com o intuito de prevenir novos casos da doença nos rebanhos.

Análise fenotípica e genotípica da virulência de Staphylococcus spp. e de sua dispersão clonal como contribuição ao estudo da mastite bovina / Phenotypic and genotypic analysis of virulence in Staphylococcus spp. and its clonal dispersion as a contribution to the study of bovine mastitis

A mastite é uma inflamação da glândula mamária causada principalmente por bactérias, dentre as quais o gênero Staphylococcus ocupa um papel importante. Bactérias pertencentes a este gênero são caracterizadas por expressar fatores de virulência que permitem sua persistência e disseminação no hospedeiro. O presente trabalho teve por objetivo avaliar fenogenotipicamente os fatores de virulência de isolados de Staphylococcus spp. a partir de casos de mastite bovina. Foram analisadas 272 amostras de leite provenientes de oito propriedades da região Sul-Fluminense do Estado do Rio de Janeiro. Após identificação, obteve-se um total de 250 isolados de Staphylococcus spp. Estes foram submetidos às provas fenotípicas de detecção da produção de "slime" em microplaca e em ágar vermelho congo; produção de hemolisinas e sinergismo hemolítico; produção de caseinase e DNase. Posteriormente foram submetidos à técnica de PCR para detecção dos genes de produção de cápsula (cap5 e cap8), fibronectina (fnbA,e fnbB), "slime" (icaA e icaD) e hemolisinas (hla e hlb). Do total avaliado, 58% (145/250) foi identificado como Staphylococcus spp. coagulase-negativos e 42% (105/250) como Staphylococcus spp. coagulase-positivos, destes 36,2% (38/105) foram identificados como S. aureus, 11,4% (12/105) como S. intermedius e 3,8% (4/105) como pertencentes ao grupo SIG. Apenas 6,4% (16/250) dos isolados foram produtores de α-hemólise, 4,8% (12/250) de β-hemólise e, 1,6% (4/250) de α e β-hemólise. A produção de caseinase foi observada em 66,4% (166/250), e a produção de "slime" avaliada pela técnica da microplaca em 76,8% (192/250) dos isolados, respectivamente. A DNase foi detectada em ECNs (38/145) e S. aureus (14/38). Os marcadores genéticos avaliados para a produção de slime, icaA e icaD apresentaram nenhuma ou leve concordância com a produção fenotípica, respectivamente, utilizando o coeficiente Kappa. Tal dado parece indicar que outros marcadores genéticos podem estar envolvidos com a expressão desta característica. Os demais genes detectados com frequência de 4% (10/250) para cap5 e para cap8, 32,8% (82/250) para fnbA, 4,4% (11/250) para fnbB, 19,2% (48/250) para hla e 18% (45/250) para hlb. O perfil circulante nas propriedades foi o 1: isolado produtor de "slime" e caseinase. O gene spaA foi positivo em todos os S. aureus, apresentando amplicons de tamanhos variados, sendo o tamanho prevalente o de 300pb. A amplificação do gene coa apresentou nove tipos polimórficos distintos, sendo prevalente o amplicon de 600pb. O gene agr foi detectado em todos os S. aureus, com amplicon de 200pb. Foi observado que os genes de virulência estudados estavam distribuídos de modo aleatório entreos 6 distintos perfis eletroforéticos obtidos através da Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE).

Mastitis is an inflammation of one or more mammary glands caused mainly by bacteria, among which the genus Staphylococcus plays an important role. Bacteria belonging to this genus are known to express virulence factors which allow their persistence and spread in the host. This study aimed to evaluate the phenotypic and genotypic aspects of virulence factors in Staphylococci spp. isolates from bovine mastitis clinical cases. A total of 272 milk samples from 8 farms in the South-Fluminense region of Rio de Janeiro were analyzed. The samples underwent conventional bacterial identification, yielding 250 Staphylococci spp. isolates. These were tested for the phenotypic detection of slime production by the microplate and Congo Red Agar methods. The hemolysins production, hemolytic synergism, caseinase and DNase production were also evaluated. The isolates were then assayed through the Polymerase Chain Reaction method to detect genes associated with virulence factors such as: capsule (cap5, cap8), fibronectin (fnbA, fnbB), slime (icaA, icaD) and hemolysins (hla e hlb). Regarding the number of isolates assessed, 58% (145/250) were identified as coagulase-negative Staphylococcus spp. and 42% (105/250) as coagulase-positive Staphylococcus spp. The latter comprised 36.2% (38/105) of isolates identified as S. aureus, 11.4% (12/105) as S. intermedius and 3.8% (4/105) belonging to the SIG group. The hemolisin production was not significant, whereas only 6,4% (16/250) produced alfa hemolysis, 4,8% (12/250) produced beta hemolysis and 1,6% (4/250) was able to produce both. Caseinase production was observed in 66.4% (166/250) and slime production assayed through the microplate method was positive in 76,8% (192/250). DNAse was detected in coagulase-negative Staphylococcus spp. (38/145) and in S. aureus (14/38). Low association between genetic detection of icaA (38/250) and icaD (54/250) and slime phenotypic expression (192/250) suggest that others genetic markers can be involved in this expression. Regarding gene amplification, the isolates did not show significant correlation between the genetic detection of icaA (38/250) and icaD (54/250) and slime production (192/250), indicating that other genetic markers may be involved in this trait expression. The frequency of the occurrence of the others studied genes was of 4% (10/250) for cap5 and cap8, 32,8% (82/250) for fnbA, 4,4% (11/250) for fnbB, 19,2% (48/250) for hla and 18% (45/250) for hlb. The major circulating strain profile on the farms encompassed slime and caseinase producer strains. The spaA gene was found in all of the S. aureus isolates, presenting varying amplicons sizes, with 300bp being the prevalent size. The amplification of the coa gene showed nine polymorphic variants, with 600bp being the prevalent amplicon. The agr gene was also detected in every S. aureus isolate, with an amplicon of 200bp. It was noticed that the presence or absence of the virulence genes assayed in this study were not correlated with the 6 distinct electrophoretic profiles obtained by PFGE.

Prevalência e etiologia da mastite bovina na bacia leiteira de Rondon do Pará, estado do Pará / Prevalence and etiology of bovine mastitis in the dairy region of Rondon do Pará, state of Pará

O objetivo do presente trabalho foi pesquisar a prevalência e a etiologia da mastite bovina na bacia leiteira do município de Rondon do Pará, bem como avaliar o perfil de sensibilidade e resistência dos agentes isolados frente aos antimicrobianos. Foram avaliadas 237 vacas mestiças de aptidão leiteira, pertencentes a nove propriedades, as quais utilizavam ordenha manual uma vez ao dia e sistema de criação extensivo em pastagens de Brachiaria brizantha, com fornecimento de sal mineral e água ad libitum. Realizou-se o exame clínico da glândula mamária, o teste da caneca telada e o California Mastitis Test. Dos 935 quartos mamários avaliados, 6,6 por cento apresentaram mastite subclínica, 1,3 por cento mastite clínica e 92,1 por cento foram negativos. As bactérias isoladas na mastite clínica foram Staphylococcus spp. coagulase negativo (25 por cento), Staphylococcus aureus (16,7 por cento), Streptococcus spp. (8,3 por cento) e Corynebacterium spp. (8,3 por cento). Na mastite subclínica foram Staphylococcus spp. coagulase negativo (32,3 por cento), Staphylococcus aureus (17,7 por cento), Staphylococcus intermedius (1,6 por cento), Streptococcus spp. (4,8 por cento), Corynebacterium spp. (4,8 por cento) e Staphylococcus spp. coagulase negativo/S. aureus (1,6 por cento). Não houve crescimento microbiano em 41,7 por cento das amostras com mastite clínica e 37,1 por cento com mastite subclínica. No antibiograma, 100 por cento dos isolados de Staphylococcus spp. coagulase negativo, S. aureus, S. intermedius, e Streptococcus spp. foram sensíveis ao sulfazotrim. Por outro lado Corynebacterium spp. foi 100 por cento resistente ao mesmo antimicrobiano. A cefalotina, cefoxitina e gentamicina, apresentaram eficácia frente às bactérias isoladas do gênero Staphylococcus spp., as quais neste trabalho representam a grande maioria dos agentes causadores de mastite. A mastite foi diagnosticada em todos os rebanhos pesquisados, contudo o número de animais acometidos foi considerado baixo; isso provavelmente deve-se à baixa produção de leite dos animais e a permanência do bezerro ao pé após a ordenha, o que favorece o esvaziamento da glândula mamária. Diante disso, faz-se necessário que medidas higiênico-sanitárias e de manejo sejam adotadas.

The prevalence and the etiology of bovine mastitis in the dairy region of the county of Rondon of Pará were investigated. The sensibility and the resistance of the isolated agents to the antimicrobiotics was evaluetad; 237 mixed-bred milk cows were used on nine properties, which were hand milked once a day and kept on Brachiaria brizantha pasture, with supply of mineral salt and water ad libitum. Clinical examination of the mammary gland, the test of the sieve and California Mastitis Test were performed. Of the 935 examined mammary quarters, 6.6 percent had subclínical mastitis, 1.3 percent clinical mastitis, and 92.1 percent were negative. The isolated bacteria in the clinical mastitis were coagulase negative Staphylococcus spp. (25 percent), Staphylococcus aureus (16.7 percent), Streptococcus spp. (8,3 percent), and Corynebacterium spp. (8.3 percent). In the subclínical mastitis coagulase negative Staphylococcus spp. (32.3 percent), Staphylococcus aureus (17.7 percent), Staphylococcus intermedius (1.6 percent), Streptococcus spp. (4.8 percent), Corynebacterium spp. (4.8 percent), and coagulase negative Staphylococcus spp./S.aureus (1.6 percent) were isolated. There was no microbial growth in 41.7 percent of the samples with clinical mastitis and in 37.1 percent with subclínical mastitis. In the antibiogram, 100 percent of the isolated negative coagulase Staphylococcus spp., S. aureus, S. intermedius, and Streptococcus spp. were sensitive to sulfazotrim. On the other hand, Corynebacterium spp. were 100 percent resistant to this same antimicrobiotic. Cefalotina, cefoxitina and gentamicina were efficient against the isolated Staphylococcus spp. which represent the greater part of the mastitis agents in this study. Mastitis was diagnosed in all flocks studied, however the number of affected animals was considered low; this probably is due to low milk production of the cows and to permanence of the calf with the mother after milking, what favors emptying the mammary gland. But hygienic sanitary measures and management practices have to be improved.

Prevalencia de mastitis bovina y su etiología infecciosa en sistemas especializados en producción de leche en el altiplano cundiboyacense (Colombia) / Prevalencia de mastites bovina e sua etiologia infeciosa nos sistemas especializados na produção de leite no altiplano cundiboyacense (Colombia) / Prevalence of bovine mastitis and its infectious etiology in specialized milk production systems at cundiboyacense plane (Colombia)

Mediante la prueba del California Mastitis Test (CMT), se evaluaron 11.416 cuartos pertenecientes a 2.854 vacas de 40 fincas especializadas en la producción de leche en el altiplano cundiboyacense, escogidas mediante un muestreo no probabilístico. De los cuartos positivos (reacciones desde trazas hasta casos clínicos) se tomó una muestra de leche para aislar los microorganismos involucrados en la mastitis bovina. El 34.40% (3.931) de los cuartos fueron positivos al CMT. El 49.01% de los aislamientos involucraron microorganismos infecciosos. Staphylococcus aureus, fue aislado en el 29.09% y se convirtió en el principal patógeno encontrado. Streptococcus agalactiae aislado en el 6.84% de las muestras. Las infecciones mixtas representaron el 1.2% y la asociación más frecuente fue la de Staph. aureus y Strep. agalactiae. Los Staphylococcus coagulasa positivos (SCP), diferentes al Staph. aureus se encontraron en el 4.04% de las muestras y en realidad no se tiene mucha información sobre ellos. Los Staphylococcus coagulasa negativos (SCN) fueron aislados en el 11.75%. Strep. uberis fue aislado en el 5.74% y Strep. dysgalactiae en el 2.62%. Corynebacterium bovis fueron aislados en el 8.44% y el Corynebacterium pyogenes en el 5.92%. El Staph. aureus esta siendo propagado por la realización de malas prácticas ganaderas en la implementación de programas de prevención y control de agentes infecciosos y por presentar múltiples factores de virulencia.

Using the Californian Mastitis Test (CMT), 11.416 udder quarts belonging to 2.854 cows from 40 milk production specialized farms of the cundiboyacense plain, selected at random, were evaluated. Of the 3.931 positive quarts (from reaction trace to clinical cases), a milk sample was taken in order to isolate the microorganisms involved in bovine. The 34.44% for the quarter were positive al CMT, the 49.01% involved infectious microorganisms. Staphylococcus aureus was the main pathogenic agent with 29.09% of the total isolations. Contrary to the normal indications from the temperate areas where Streptococcus agalactiae has been reported as the main pathogen with more than 50% of prevalence, in this study it was isolated in only 6.84% of the samples. Mix infections represented 1.2% and the most frequent association was between Staph. aureus and Strep. agalactiae. The coagulase positive Staphylococci (different to Staph. aureus) were found in 4.04% of the sample. The coagulase negative Staphylococci were isolated in 11.75% of the samples. Isolates of Strep. uberis, Strep. dysgalactiae, Corynebacterium bovis and Corynebacterium poygenes, were found in 5.74, 2.62, 8.44, and 5.92% of the samples, respectively. The main pathogen found in this study was the S. aureus, an infectious agent that is being propagated by conducting poor farming practices in implementing prevention and control programs.

Com a utilização do teste California Mastitis Test (CMT), foram avaliados 11.416 quartos pertencentes a 2.854 ubres de vacas de 40 fazendas especializadas na produção de leite no altiplano cundiboyacense. Os locais foram selecionados mediante seleção ao ocaso não probabilístico. Dos quartos positivos (reações desde traças ate casos clínicos) foi analisada uma amostra de leite para isolar os microorganismos envolvidos nas mastites bovinas. O 34.40% (3.931) dos quartos foram positivos ao CMT. O 49.01% dos isolados involucraram microorganismos infecciosos. Staphylococcus aureus foi isolado nos 29.09% e apresenta o principal patógeno encontrado. O Streptococcus agalactiae foi isolado nos 6.84% das amostras. As infecciones combinadas apresentaram o 1.2% e a relação mais freqüente foi Staph. aureus e Strep. agalactiae. Os Staphylococcus coagulasa positivos (SCP), diferentes ao Staph. aureus foram determinados no 4.04% das amostras, onde não existe muita informação sobre eles. Os Staphylococcus coagulasa negativos (SCN) foram isolados nos 11.75%. Streptococcus uberis foi isolado nos 5.74% e Strep. dysgalactiae nos 2.62%. Corynebacterium bovis foi isolado nos 8.44% e o Corynebacterium pyogenes nos 5.92%. O Staph. aureus, agente infeccioso esta sendo propagado pela realização de mas práticas na cria de gado com a implementação de programas de prevenção, controle e apresentação de múltiplas fatores de virulência.

Mastite por leveduras em bovinos leiteiros do Sul do Estado de Minas Gerais, Brasil / Mastitis caused by yeasts in dairy herds in the South of the Minas Gerais State, Brazil

O objetivo deste trabalho foi estudar a freqüência de infecções intramamárias ocasionadas por leveduras a partir de amostras de leite (n=1710) coletadas em 40 rebanhos leiteiros do Estado de Minas Gerais. Cinqüenta e seis estirpes de leveduras do gênero Candida e uma linhagem de Trichosporon loubieri foram isoladas. Candida albicans foi a espécie dominante (28,1 por cento das cepas), seguida por Candida parapsilosis (19,3 por cento), Candida catenulata (14,0 por cento), Candida glabrata (14,0 por cento) e Candida tropicalis (8,8 por cento). Infecções mistas foram detectadas em 29,8 por cento das vacas levedura-positivas. Amostras positivas para leveduras foram predominantemente obtidas (84 por cento) de vacas com mastite subclínica. A baixa taxa de isolamento de leveduras sugere que estes microrganismos não são relevantes para mastite bovina na região estudada.

The objective of this study was to report the frequency of intramammary infections by yeasts, in Minas Gerais State, from milk samples (n = 1710) collected in 40 dairy herds. Fifty six yeast strains of the genus Candida and one strain of Trichosporon loubieri were isolated. Candida albicans was the dominant species (28.1 percent of the strains), followed by Candida parapsilosis (19.3 percent), Candida catenulata (14.0 percent), Candida glabrata (14.0 percent), Candida tropicalis (8.8 percent). Mixed infections were detected in 29.8 percent of yeast-positive cows. The yeast infection was more frequent (84 percent) in cows with subclinical mastitis. The low rate of isolation of yeasts suggests that these microorganisms are not relevant to bovine mastitis in the studied region.

Produção de enterotoxinas e da toxina da síndrome do choque tóxico por cepas de Staphylococcus aureus isoladas na mastite bovina / Production of enterotoxins and toxic shock syndrome toxin by Staphylococcus aureus strains isolated from bovine mastitis

A total of 72 strains of Staphylococcus aureus were examined for the production of staphylococcal enterotoxins (SE) A, B, C, D and toxic shock syndrome toxin (TSST-1). The strains were isolated from milk samples from cows with mastitis in dairy herds of São Paulo State, Brazil. Off 72 isolates, 38 (52.8 percent) produced SEA, 38 (52.8 percent) SEB, 32 (44.4 percent) SED, 28 (38.9 percent) SEC and 27 (37.5 percent) TSST-1. From the 72 strains, 66 (91.7 percent) produced, at least, one or more toxin, including TSST-1

Prevalência da mastite bovina causada por Prototheca zopfii em rebanhos leiteiros, na regiäo norte do Paraná / Prevalence of bovine mastitis due to Prototheca zopfii in dairy cattle in north Paraná, Brazil

Algas do gênero Prototheca têm sido relacionadas como agente etiológico na ocorrência de mastite bovina, entretanto, nenhum caso foi relatado no estado do Paraná. O presente trabalho objetivou determinar a prevalência desta alga, enquanto agente etiológico nas mastites bovinas, em rebanhos leiteiros, na regiäo norte do Paraná. Foram visitadas 20 propriedades produtoras de leite e realizados exames clínicos e teste do CMT (California Mastitis Test) em todos os animais em lactaçäo. A alga Prototheca zopfii foi isolada de dois animais de uma das propriedades. Todas as cepas isoladas de Prototheca zopfii mostraram-se resistentes aos antimicrobianos testados.

Açäo de antibióticos e quimioterápicos sobre alguns agentes bacterianos da mastite bovina, isolados da água utilizada no processo de obtençäo do leite / Action of antibiotics and chemoterapics on some bacterial agents of bovine mastitis isolated from water utilized in milking process

Três cepas de Staphylococcus aureus, 73 de Staphylococcus coagulase negativa e 28 de Escherichia coli, isoladas a partir das amostras de água oriundas de 10 propriedades leiteiras, foram submetidas ao teste de sensibilidade "in vitro" frente a alguns antibióticos e quimioterápicos. Os resultados evicenciaram que todas as cepas isoladas apresentaram resistência a pelo menos um dos princípios ativos testados. As cepas de Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase negativa e de Escherichia coli apresentaram resistência a três ou mais princípios ativos em 100,00 por cento, 84,93 por cento e 71,43 por cento dos casos, respectivamente. Tais achados säo preocupantes, principalmente se considerado o importante papel que a água empregada no processo de obtençäo do leite pode representar na veiculaçäo dos referidos agentes etiológicos da mastite bovina

Etiologia e sensibilidade bacteriana da mastite bovina subclínica / Etiology and sensitivity tests of bovine subclinical mastitis

No período de 1986-1988, foram examinadas 702 amostras de leite bovino com mastite subclínica, pelo Serviço de Diagnóstico Microbiológico do Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnica - UNESP - Campus de Botucatu. Isolaram-se 802 microrganismos em cultura pura e em associaçäo, como se segue: Staphylococcus aureus 35,53 por cento, Staphylococcus epidermidis 23,19 por cento, Corynebacterium bovis 9,23 por cento, Corynebacterium pyogenes 4,49 por cento, Streptococcus uberis 4,36 por cento, Streptococcus dysgalactiae 3,37 por cento, Candida albicans 3,37 por cento, Streptococcus agalactiae 3,24 por cento, Escherichia coli 2,87 por cento, Pseudomonas aeruginosa 2,37 por cento, Klebsiella sp 2,12 por cento, Alcaligenes faecalis 2,0 por cento, Proteus mirabilis 1,37 por cento, Pasteurella multocida 1,25 por cento, Micrococcus sp 0,37 por cento, Salmonella sp 0,25 por cento, Acinetobacter calcoaceticus 0,25 por cento, Nocardia asteroides 0,25 por cento e Enterobater aglomerans 0,12 por cento. Pelo estudo de sensibilidade bacteriana frente a diferentes drogas antimicrobinas verificou-se que para os estafilococos, que foram os microrganismos isolados com maior frequência (58,72 por cento), a cefaloridina foi a droga de melhor açäo, com 79,4 por cento de amostras sensíveis, vindo a seguir o cloranfenicol com 76,7 por cento e a gentamicina com 72,5 por cento de sensibilidade. Com relaçäo aos outros microrganismos isolados, verificou-se que em sua maioria foram sensíveis ao cloranfenicol, gentamicina, cefaloridina, tetraciclina e nitrofurano

Enterotoxigenicidade de Staphylococcus aureus, isolados de vacas com mastite / Enterotoxicity of Staphylococcus aureus isolated from mastitic cows

A prevalência da mastite subclínica foi de 48 por cento, através da reação leucocitária pela prova do "California Mastitis Test" (CMT) em 2.317 vacas em lactação de 86 produtores de uma bacia leiteira no Estado do Rio de Janeiro. Do total de 2,725 lactoculturas, provenientes de 692 vacas, 1.026 (37,65 por cento) apresentaram CMT positivos e 546 (53,22 por cento) foram exame bacteriológico positivo. O Staphylococcus aureus foi o agente mais encontrado, sendo isolado de 229 (41,94 por cento) amostras de leite em todos os rebanhos trabalhados. A possibilidade de contaminação de produtos de origem láctea, por S. aureus e sua enterotoxina induziu a pesquisa da mesma em algumas amostras desse agente. As cepas de S. aureus isoladas de tetas com forte reação leucocitária, evidenciada através do CMT, foram semeadas em caldo cérebro coração com glicerina em partes iguais e mantidas no "freezer" a menos de 16ºC. A termonuclease foi determinada pelo método de Lachica et al. (1971). A pesquisa de enterotoxina dos tipos A, B, C, D e E foi feita pela técnica utilizada por Robbins et al. (1974) no Instituto de Microbiologia da UFRJ. Em 93 cepas de S. aureus analisadas apenas uma produziu enterotoxina do biotipo A, considerada a de maior ocorrência nas intoxicações alimentares, sendo encontrada em 75 por cento dos surtos. Em oito cepas não foi detectada a presença de nucleina termoestável. Mesmo tendo sido baixo o número de cepas enterotoxigênicas, acredita-se que sejam necessários cuidados com o rebanho leiteiro, evitando-se misturar o leite de fêmeas infectadas aos de animais sadios. Tal procedimento constitui uma ameaça à saúde humana, uma vez que o S. aureus é evidenciado em índice elevado na maioria dos rebanhos.

Pesquisa de Staphylococcus aureus enterotoxigênicos em leite de vacas com mastite subclínica / Research of enterotoxigenic Staphylococcus aureus in milk from subclinc mastitic cows

Foram examinados pelo "California Mastitis Tes" (CMT) 497 vacas lactantes em 17 propriedades rurais produtoras de leite tipo B, na regiäo de Ribeiräo Preto, Säo Paulo. Entre as amostras de leite procedentes das 59 (11,9%) fêmea reagentes a esta prova, o Staphylococcus aureus foi isolado de 32 (54,2%). A verificaçäo da capacidade enterotoxigênica das cepas isoladas, revelou que 1 (1,3%) era produtora de enterotoxina do tipo B